当前位置:首页 > 金钗石斛总生物碱的提取条件

金钗石斛总生物碱的提取条件

[导读]为科学合理开发金钗石斛药材资源,采用单因素试验分析提取温度、乙醇浓度、提取时间、固 液比和提取次数对金钗石斛总生物碱含量的影响,酸碱滴定法测定总生物碱含量。

  金钗石斛药材为兰科(Orchidaceae)石斛属(Dendrobium)植物金钗石斛(Dendrobium nobileLindl.)的新鲜或干燥茎。入药始载于《神龙本草经》,其性微寒、味甘,具有益胃生津,滋阴清热的功效。金钗石斛自古以来作为我国名贵中药材之一,在临床上有着非常好的疗效,主要用于热病阴伤,口干燥渴,咳嗽痰少,是2010年版中国药典收录4种石斛属药用植物正品之一,其化学成分主要是倍半萜型生物碱类和多糖类,倍半萜型总生物碱种类十分丰富,其含量往往与该种属石斛药材质量、药效密切相关。若仅针对某2种有效生物碱成分开展金钗石斛的提取和含量测定方法研究,不可避免地导致所建立方法的局限性,系统地建立针对金钗石斛总生物碱的提取和相应含量测定方法十分必要。鉴于此,笔者采用经典酸碱滴定法,运用系统正交优化设计,对金钗石斛总生物碱的提取条件进行优化,以期为金钗石斛药材及其中药制剂生产提供理论基础和指导,以促进我国金钗石斛药材资源的科学合理开发。



材料与方法

药材

  金钗石斛(贵阳太升药材,批号201503),经贵州医科大学药学院鉴定为兰科植物石斛属金钗石斛(Dendrobium nobile Lindl.)的干燥茎。经粉碎、过20目筛后,得到金钗石斛药材粗粉,备用。

仪器

  RE-201D旋转蒸发仪(郑州英峪予华),RE-201D恒温水油预锅(郑州英峪予华),AY-120电子天平(日本岛津),Q-250B高速粉碎机(上海冰都),420型三用水箱(金坛富华),101-1AB型电热鼓风干燥箱(天津泰斯特),SB-5200D超声清洗机宁波新芝生物)。

试剂

  试验所用试剂(浓硫酸、氢氧化钠、无水乙醇、甲基红、溴甲酚绿、氯仿等)均为分析纯,水为自制蒸馏水。

  硫酸滴定剂的配制:精密量取5mL浓硫酸放入装有少量蒸馏水的100mL容量瓶中,放至室温,再用蒸馏水稀释至刻度;取该硫酸溶液5mL 于100mL容量瓶中用蒸馏水稀释至刻度,得到约0.046mol/L的硫酸溶液。将该硫酸溶液与蒸馏水按1∶3.6混合,经无水碳酸钠标定后,最终得到0.01mol/L硫酸溶液。氢氧化钠滴定剂的配制:取适量氢氧化钠放入小烧杯中加入少量蒸馏水使其饱和。放至室温后,取该饱和氢氧化钠溶液10mL于100mL容量瓶中,用蒸馏水稀释至刻度;取该氢氧化钠溶液5mL于500mL 容量瓶中,加蒸馏水稀释至刻度。经0.01mol/L 硫酸溶液标定后, 最终得到0.017 4mol/L氢氧化钠溶液。甲基红-溴甲酚绿显色剂的配制:精密称取0.0500g甲基红粉末,放入50mL容量瓶中,用无水乙醇溶解并稀释至刻度,得到0.1%的甲基红溶液。精密称取0.1000g溴甲酚绿粉末,放入50mL容量瓶中,加入无水乙醇溶解并稀释至刻度,得到0.2%的溴甲酚绿溶液。最后取0.1%甲基红溶液20mL与0.2%溴甲酚绿溶液30mL放入50mL容量瓶中混合均匀,得到甲基红—溴甲酚绿(2∶3,v/v)显色剂。



结论与讨论

  试验结果表明,金钗石斛总生物碱提取的最佳条件为提取温度85℃,乙醇浓度90%,提取时间3h,固液比1∶20,提取次数为2次,在该条件下金钗石斛总生物碱的平均提取率为87.8mg/g。金钗石斛药材资源的合理开发,其实际有效地提取方法与整体质量评价手段是金钗石斛药材开发的重要环节。生物碱类能客观体现不同产地、不同采收期、不同批次的金钗石斛药材品质,试验采用方法简单、成本低廉、结果准确的剩余量酸碱滴定法,能够快速准确地测定药物提取过程中金钗石斛总生物碱的含量,并通过空白试验对照与多组平行试验,最大限度地降低酸碱滴定方法自身误差,提高试验结果的准确性和代表性。石斛碱一直被公认为是金钗石斛区别其他石斛品种的特有成分之一,试验以石斛碱来计算金钗石斛生物碱的含量,能够准确地、全面地反映金钗石斛药材的实际质量状况。以金钗石斛总生物碱为评价指标,进行单因素试验和L9(34)正交试验,综合考察后确定金钗石斛总生物碱的最佳提取条件。在研究过程中发现,提取温度高于85℃,将明显降低该药材中总生物碱的提取率,过高温度不利于生物碱类成分的稳定性;提取溶液乙醇浓度、提取时间是最影响总生物碱提取率的2个工艺参数,表明小极性的金钗石斛生物碱、苷元类成分所占比例较大。基于明确的药理试验结果、临床疗效,金钗石斛总生物碱的定性、定量与药理作用机制研究将是下一步需要解决的问题。




相关文章