JY92-IIN 细胞破碎仪 宁波新芝 scientz-IID
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植物细胞的破碎、预分级及蛋白的提取

[导读]为了得到蛋白,首先要对细胞进行破碎,通常使用的方法有酶解法、冷冻法和机械法.

植物细胞的破碎、预分级及蛋白的提取

  为了得到蛋白,首先要对细胞进行破碎,通常使用的方法有酶解法、冷冻法和机械法. 一般来说,冷冻法效率较低,酶解法则容易引入外源蛋白杂质,因此机械法较常见. 目前最常用的方法为液氮研磨法,但在研磨中需注意提前预冷研钵,用液氮充分冻融组织,且快速充分的研磨成粉末,同时迅速加入蛋白沉淀剂( 提取液) 在低温( -20 ℃) 下充分沉淀.木质化程度较高的植物材料中加入石英砂则可得到较好的破碎效果.

  由于技术的原因,双向电泳的结果分析范围有限. 为了降低样品的复杂性以及实验目的的需求( 如研究低丰度蛋白) ,可对蛋白质样品进行分级预处理. 即通过各种手段( 如色谱技术、超速离心、亚细胞分级分离等) ,将蛋白质依据性质和在细胞中位置的不同进行分级,通过分级可以将研究性蛋白进行浓缩或去除干扰性蛋白,以此来有效去除非研究对象的干扰蛋白( 如高丰度蛋白) ,以达到精确研究结果的目的. 未来的分级方向将直接涉及蛋白质生理特性的等电点和疏水性.

  常见的植物蛋白提取方法有两种,分别是基于酚和TCA( 三氯乙酸) 沉淀的方法. TCA 沉淀法操作简单,适用于幼嫩植物体; 同时TCA 是一种强酸,可抑制植物中各种蛋白酶的活性,从而起到保护蛋白免于降解的目的. 在实际应用中,往往使用TCA - 丙酮( 含15% ~ 40% TCA) 比单独的TCA 或丙酮效果好,因丙酮有利于去除溶于有机溶性的杂质,但沉淀的蛋白重新溶解则较困难. 酚抽提法适用于复杂植物,基于该方法可提取更多的糖蛋白,同时酚抽提法中相关试剂毒性较大,且费时费力,因此TCA - 丙酮法在植物蛋白提取中较常用.

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