新芝粉碎机-植物细胞的破碎

植物细胞的破碎、预分级及蛋白的提取

  为了得到蛋白，首先要对细胞进行破碎，通常使用的方法有酶解法、冷冻法和机械法． 一般来说，冷冻法效率较低，酶解法则容易引入外源蛋白杂质，因此机械法较常见． 目前最常用的方法为液氮研磨法，但在研磨中需注意提前预冷研钵，用液氮充分冻融组织，且快速充分的研磨成粉末，同时迅速加入蛋白沉淀剂( 提取液) 在低温( －20 ℃) 下充分沉淀．木质化程度较高的植物材料中加入石英砂则可得到较好的破碎效果．

  由于技术的原因，双向电泳的结果分析范围有限． 为了降低样品的复杂性以及实验目的的需求( 如研究低丰度蛋白) ，可对蛋白质样品进行分级预处理． 即通过各种手段( 如色谱技术、超速离心、亚细胞分级分离等) ，将蛋白质依据性质和在细胞中位置的不同进行分级，通过分级可以将研究性蛋白进行浓缩或去除干扰性蛋白，以此来有效去除非研究对象的干扰蛋白( 如高丰度蛋白) ，以达到精确研究结果的目的． 未来的分级方向将直接涉及蛋白质生理特性的等电点和疏水性．

  常见的植物蛋白提取方法有两种，分别是基于酚和TCA( 三氯乙酸) 沉淀的方法． TCA 沉淀法操作简单，适用于幼嫩植物体; 同时TCA 是一种强酸，可抑制植物中各种蛋白酶的活性，从而起到保护蛋白免于降解的目的． 在实际应用中，往往使用TCA － 丙酮( 含15% ～ 40% TCA) 比单独的TCA 或丙酮效果好，因丙酮有利于去除溶于有机溶性的杂质，但沉淀的蛋白重新溶解则较困难． 酚抽提法适用于复杂植物，基于该方法可提取更多的糖蛋白，同时酚抽提法中相关试剂毒性较大，且费时费力，因此TCA － 丙酮法在植物蛋白提取中较常用．