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制备具有叶酸靶向性的载紫杉醇磷脂一聚合物杂化纳米粒

[导读]制备具有叶酸靶向性的载紫杉醇磷脂一聚合物杂化纳米粒(FI'X—FLPNPs),并研究其对 乳腺癌细胞EMT,6的细胞毒性及体外细胞吞噬。

  紫杉醇(paclitaxel,PTX)是从红豆杉科红豆杉 属植物紫杉的树皮中分离得到的天然二萜类抗癌 药,主要用于卵巢癌、乳腺癌及非小细胞肺癌的临 床治疗1lI:由于PTX在水中溶解度极低,临床用聚氧 乙烯蓖麻油和乙醇等比例混合的溶剂溶解后给药, 但该助溶剂会引发严重过敏反应以及神经毒性和 肾毒性等不良反应口因此,设计更易被患者接受的 PTX新型制剂以减少传统助溶剂引发的毒副作用 成为一个重要的研究方向,如脂质体、微乳、纳米粒 及包合物等。引: 磷脂一聚合物杂化纳米粒(1ipid.polymer hybrid nanoparticles,LPNPs)是一种同时兼备脂质体及聚 合物胶束优点而避免两者缺点的新型药物载体。 LPNPs具有能增溶疏水性药物的疏水性聚合物内 核;外层被磷脂层包裹,使其具有良好的生物相容 性、稳定性以及体内长循环特性;表面还可用具有 靶向能力的配体修饰获得主动靶向功能阳引: 叶酸(folic acid,FA)是细胞增殖时参与碱基合 成的必需维生素,其受体在多种癌细胞表面过度表 达…2I,I而在人体正常组织中的表达高度保守:叶酸 具有无毒、无免疫原性、稳定性好、与受体亲和力强 等优点,且通过叶酸与其受体的特异性结合,可介 导细胞内吞作用摄取药物mI:因此,叶酸也成为目前 应用最多的用于主动靶向修饰的配体”15I: 本研究采用聚己内酯一聚乙二醇一聚己内酯 (PCL—PEG.PCL)、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺一甲氧 基聚乙二醇(DSPE.mPEG2000)、偶联叶酸的磷脂 (Folate.PEG(2000).DSPE)为药物载体,通过薄膜水 化法使其自组装以制备具有叶酸靶向性的载紫杉 醇磷脂一聚合物杂化纳米粒(PTX.FLPNPs),研究肿 瘤细胞对其的吞噬效果及其对肿瘤细胞的细胞 毒性.

材料与方法 

  主要材料与仪器 PCL—PEG.PCL聚合物(PCL相对分子质量为 4 000 u,PEG相对分子质量为8 000 U)(中国医学科 学院生物医学T程研究所基因工程实验室合成), DSPE.mPEG2000、Folate.PEG(2000)一DSPE(美国 Avanti Polar Lipids公司),PTX注射剂(6 mg/m1)(北 京协和药厂),PTX原料药(纯度>99%)(中国重庆美 联制药有限公司),无叶酸的RPMll640培养基、胎 牛血清、胰蛋白酶(美围Gibco公司),尼罗红(NileRed,NR)(美国Sigma公司),47,6.二脒基一2一苯基吲 哚(47,6-diamidino.2.phenylindole,DAPI)染色液、微 丝绿色荧光探针(Actin.Tracker Green)、免疫荧光染 色二抗稀释液、免疫染色同定液、免疫染色洗涤液 (上海碧云天生物技术有限公司),MTS试剂(美 国Promega公司),其他试剂均为市售分析试剂: Eyela N一1001旋转蒸发仪(日本东京理化公 司),SCIENTZ-IID超声波细胞破碎仪(宁波新芝生物科技股份有限公司),J一25高速冷冻离心机(美国Beckman 公司),Nano—ZS粒度分析仪(英国Malvern公司), Tecnai—F20透射电子显微镜(荷兰FEI公司),高效 液相色谱仪(high performance liquid chromatography, HPLC)(美国Waters公司),LSM710全光谱型激光 扫描共聚焦显微镜(德围Carl ZEISS公司),SCIENTZ-10N真空冷冻干燥机(宁波新芝生物科技股份有限公司),CO:培养箱 (日本SANYO公司)

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