紫杉醇(paclitaxel，PTX)是从红豆杉科红豆杉 属植物紫杉的树皮中分离得到的天然二萜类抗癌 药，主要用于卵巢癌、乳腺癌及非小细胞肺癌的临 床治疗1lI：由于PTX在水中溶解度极低，临床用聚氧 乙烯蓖麻油和乙醇等比例混合的溶剂溶解后给药， 但该助溶剂会引发严重过敏反应以及神经毒性和 肾毒性等不良反应口因此，设计更易被患者接受的 PTX新型制剂以减少传统助溶剂引发的毒副作用 成为一个重要的研究方向，如脂质体、微乳、纳米粒 及包合物等。引： 磷脂一聚合物杂化纳米粒(1ipid．polymer hybrid nanoparticles，LPNPs)是一种同时兼备脂质体及聚 合物胶束优点而避免两者缺点的新型药物载体。 LPNPs具有能增溶疏水性药物的疏水性聚合物内 核；外层被磷脂层包裹，使其具有良好的生物相容 性、稳定性以及体内长循环特性；表面还可用具有 靶向能力的配体修饰获得主动靶向功能阳引： 叶酸(folic acid，FA)是细胞增殖时参与碱基合 成的必需维生素，其受体在多种癌细胞表面过度表 达…2I，I而在人体正常组织中的表达高度保守：叶酸 具有无毒、无免疫原性、稳定性好、与受体亲和力强 等优点，且通过叶酸与其受体的特异性结合，可介 导细胞内吞作用摄取药物mI：因此，叶酸也成为目前 应用最多的用于主动靶向修饰的配体”15I： 本研究采用聚己内酯一聚乙二醇一聚己内酯 (PCL—PEG．PCL)、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺一甲氧 基聚乙二醇(DSPE．mPEG2000)、偶联叶酸的磷脂 (Folate．PEG(2000)．DSPE)为药物载体，通过薄膜水 化法使其自组装以制备具有叶酸靶向性的载紫杉 醇磷脂一聚合物杂化纳米粒(PTX．FLPNPs)，研究肿 瘤细胞对其的吞噬效果及其对肿瘤细胞的细胞 毒性．

材料与方法 

  主要材料与仪器 PCL—PEG．PCL聚合物(PCL相对分子质量为 4 000 u，PEG相对分子质量为8 000 U)(中国医学科 学院生物医学T程研究所基因工程实验室合成)， DSPE．mPEG2000、Folate．PEG(2000)一DSPE(美国 Avanti Polar Lipids公司)，PTX注射剂(6 mg／m1)(北 京协和药厂)，PTX原料药(纯度>99％)(中国重庆美 联制药有限公司)，无叶酸的RPMll640培养基、胎 牛血清、胰蛋白酶(美围Gibco公司)，尼罗红(NileRed，NR)(美国Sigma公司)，47，6．二脒基一2一苯基吲 哚(47，6-diamidino．2．phenylindole，DAPI)染色液、微 丝绿色荧光探针(Actin．Tracker Green)、免疫荧光染 色二抗稀释液、免疫染色同定液、免疫染色洗涤液 (上海碧云天生物技术有限公司)，MTS试剂(美 国Promega公司)，其他试剂均为市售分析试剂： Eyela N一1001旋转蒸发仪(日本东京理化公 司)，SCIENTZ-IID超声波细胞破碎仪(宁波新芝生物科技股份有限公司)，J一25高速冷冻离心机(美国Beckman 公司)，Nano—ZS粒度分析仪(英国Malvern公司)， Tecnai—F20透射电子显微镜(荷兰FEI公司)，高效 液相色谱仪(high performance liquid chromatography， HPLC)(美国Waters公司)，LSM710全光谱型激光 扫描共聚焦显微镜(德围Carl ZEISS公司)，SCIENTZ-10N真空冷冻干燥机(宁波新芝生物科技股份有限公司)，CO：培养箱 (日本SANYO公司)